HPLC

کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا یک تکنیک تحلیلی برای جداسازی، شناسایی و تعیین کمیت اجزای یک مخلوط است. این تنها بزرگترین تکنیک کروماتوگرافی است که برای اکثر آزمایشگاه‌ها در سراسر جهان ضروری است.

 چگونه کار می کند؟

در کروماتوگرافی ستونی، حلال از طریق یک ستون پر از یک جاذب تحت نیروی جاذبه چکه می کند.  یک شکل بسیار بهبود یافته از کروماتوگرافی ستونی است. یک پمپ یک حلال را تحت فشارهای بالا تا 400 اتمسفر از یک ستون عبور می دهد. مواد بسته بندی ستون یا جاذب یا فاز ثابت معمولاً یک ماده دانه ای است که از ذرات جامد مانند سیلیس یا پلیمرها ساخته شده است.

فشار این تکنیک را در مقایسه با کروماتوگرافی ستونی بسیار سریعتر می کند. این اجازه می دهد تا از ذرات بسیار کوچکتر برای مواد بسته بندی ستون استفاده کنید. ذرات کوچکتر سطح بسیار بیشتری برای برهمکنش بین فاز ساکن و مولکول هایی که از آن عبور می کنند دارند. این منجر به جداسازی بسیار بهتر اجزای مخلوط می شود.

مایع تحت فشار معمولاً مخلوطی از حلال‌هایی مانند آب، استونیتریل و/یا متانول است و فاز متحرک نامیده می‌شود.

اجزای یک مخلوط به دلیل درجات مختلف برهمکنش با ذرات جاذب از یکدیگر جدا می شوند. این باعث می شود که نرخ های شستشوی متفاوتی برای اجزای مختلف ایجاد شود و منجر به جدا شدن اجزا در هنگام خروج از ستون می شود. در مقایسه با کروماتوگرافی ستونی، این دستگاه خودکار و بسیار حساس است.

انواع دستگاه HPLC

دو نوع متداول  فاز نرمال و فاز معکوس هستند.

 فاز نرمال

ستون با ذرات ریز سیلیس و یک حلال غیر قطبی، به عنوان مثال، هگزان پر شده است. یک ستون معمولی دارای قطر داخلی 4.6 میلی متر یا کمتر و طول 150 تا 250 میلی متر است. ترکیبات غیر قطبی در مخلوط سریعتر از ستون عبور می کنند، زیرا ترکیبات قطبی نسبت به ترکیبات غیر قطبی بیشتر به سیلیس قطبی می چسبند.

فاز معکوس

اندازه ستون یکسان است. ستون با ذرات سیلیس پر شده است که برای غیر قطبی شدن آنها اصلاح شده است. این کار با اتصال زنجیره های هیدروکربنی طولانی (8 تا 18 اتم C) به سطح آن انجام می شود. یک حلال قطبی، به عنوان مثال، مخلوطی از آب و الکلی مانند متانول استفاده می شود. ترکیبات قطبی در مخلوط سریعتر از ستون عبور می کنند زیرا یک جاذبه قوی بین حلال قطبی و مولکول های قطبی در مخلوط رخ می دهد.

مولکول های غیر قطبی در مسیر عبور از ستون کند می شوند. آنها درجات مختلفی از جاذبه را با گروه های هیدروکربنی تشکیل می دهند که عمدتاً از طریق نیروهای پراکندگی واندروالس و برهمکنش های آبگریز هستند. آنها همچنین در اجزای فاز متحرک آبی کمتر محلول هستند و تعامل آنها با گروه های هیدروکربنی را تسهیل می کند.

.فاز معکوس متداول ترین شکل این دستگاه است

همچنین میتوانید ویدیو عملکرد دستگاه HPLC را از کانال آپارات ما تماشا کنید .